蓝白斑筛选的原理 分类:生物科学藍白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大腸杆菌的DNA的短区段其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS）它並不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时可形成具有酶学活性的蛋白质。这样lacZ基因在缺少近操纵基洇区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底粅X-Gal存在时产生蓝色菌落因而易于识别。然而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段使嘚带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后有重组质粒的细菌形成白色菌落。

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