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【求助】用胰酶消化贴壁细胞一般消化多长时间?
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这个帖子发布于11年零58天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
用胰酶消化贴壁细胞一般消化多长时间?:8)消化温度是多少?:O)可以放到培养箱里消化吗?:?)
谢谢各位指教
不知道邀请谁？试试他们
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第一个问题因细胞而异如成纤维细胞很好消化（一分钟），而上皮细胞对胰酶很赖受，要很长时间。消化温度一般室温，也不能太低，25以上吧，为了加快消化可以放在培养箱内，但是我们没有这样，就在室温，边消化边观察，细胞开始变圆，就终止了。放在培养箱里不方便观察。
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心肌细胞只要0.25的酶，2-3分钟即可，不用放入培养箱
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胰酶消化贴壁细胞一般消化3-4分钟，消化温度是37。可以放到培养箱里消化
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如果需时较长，放在培养箱里，否则没必要。
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根据细胞而定了，建议一边消化一边观察，我养的是VSMC，用的是胰酶和EDTA消化 ，室温下1-2分钟就可以了。
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我的骨髓干细胞消化的时候，有的细胞已经悬浮起来了，但还有很多却还是伸展的很开的，低倍镜下可以看到很须状物，吹打的时候很多细胞吹不下来，传代后又可以看到很多细胞碎片，细胞的密度也不高，不知道是不是吹打时间太长细胞都死了还是怎么回事，但是吹的时间不长细胞又下不来，不知道什么原因
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一般不超过3分钟,我养的HepG2曾创下13分钟消化记录.我是常规放孵箱的,没必要常常观察的.不过还是根据你养的细胞特性和胰酶活性决定.
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用胰酶消化时间一般根据细胞的不同而不同，有时还与细胞状态、胰酶配制的时间、温度有关，不能确定具体要多久时间。但同一种细胞、同样的条件下消化时间基本相同。
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我完全同意chenchunyuan 同仁的意见:用胰酶消化时间一般根据细胞的不同而不同，有时还与细胞状态、胰酶配制的时间、温度有关，不能确定具体要多久时间。但同一种细胞,培养时间长短不同时,消化时长也有异.边消化边观察,这点很重要.
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不同的细胞用胰酶 消化的时间不同，主要看贴壁的牢固程度，我养的神经杂交瘤细胞用百分之0.1即可。
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不同的细胞用胰酶 消化的时间不同，主要看贴壁的牢固程度，我养的神经杂交瘤细胞用百分之0.1即可。
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感觉不同的细胞所需时间不同，如我培养的巨噬细胞，要先洗两遍后再用胰酶-EDTA37°C消化5分钟才可以。
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胰酶消化主要还是分细胞而异的，一般的细胞都是37度消化3－5分钟，培养箱37度。你如果怕消化过了，可以隔一段时间显微镜观察，细胞如果变园了，就可以了。又很多细胞很难消化，比如上面提到的HepG2，我在消化的时候要先用无血清培养基洗一下，PBS洗一下，然后再用胰酶消化，实在不行有的时候还要用移液管反复吹打才能将细胞打散，很麻烦那
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这个凭经验，没有规定的时间呀，有些细胞就好消化而有的细胞就不好消化。
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细胞变圆就终止消化以后贴壁的细胞是否都能脱落下来?有的还成片脱落?
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我在消化细胞之前会用HANKS冲洗一下，然后根据养的细胞的性质加入胰酶－EDTA,就我自己的感觉，胰酶－EDTA混合液的消化效果好一些，我用过胰酶消化，同一种细胞，单纯用胰酶消化的话，相对时间要长些。
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还有我还有个疑问，请教一下各位，EDTA对细胞生长有影响吗？
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丁香园荣誉版主
erythrocyte2005 上皮细胞对胰酶很赖受，要很长时间。牛LEC用EDTA+胰酶消化时间挺长至少4-5分钟，但HLEC-B3仅用胰酶只要1-2分钟。都是上皮细胞。leileili1225 wrote:还有我还有个疑问，请教一下各位，EDTA对细胞生长有影响吗？EDTA有利于细胞分散，但会影响细胞的贴壁，离心可去除，不放心的话再用缓冲液洗一次。feifei125 wrote:细胞变圆就终止消化以后贴壁的细胞是否都能脱落下来?有的还成片脱落?可以，至少我养的LEC可以，轻轻吹打一下就能脱落下来，再反复吹打成单细胞悬液
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tcmihujun edited on
究竟加多少胰酶可以完全终止消化?
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加胰酶终止消化?
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丁香园荣誉版主
feifei125 究竟加多少胰酶可以完全终止消化?写错了吧:D加含血清的培养液终止消化，一般加多少消化液就加多少含10％左右血清的培养液，或者只加一半的量，自己看着办，我是加一半的，省点，细胞状态不受影响就成嘛
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消化的时间要看你的胰酶的活性，一般是刚配的胰酶的话你消化的时间就很短了，如果是保存比较久了的时间就相对较长。一般第一次用新的胰酶你可以边观察，到全部变成圆的你就可以终止消化了，下次照这次的就可以了
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我想要一本NCI的书,可以帮忙吗
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丁香李立 我想要一本NCI的书,可以帮忙吗不要在这里求助电子书籍:P
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我的是一种良性肿瘤细胞 消化时候一般镜下观察看大部分都变圆 晃晃可以动了 就加入之前的培养基终止，大家有没有推荐的好的细胞培养书参考一下 谢谢！
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我认为细胞消化时间跟胰酶浓度、细胞状态及细胞种类有关，不同的细胞消化时间不同，需要慢慢摸索，像Hela细胞在同等条件下就比293细胞消化时间要长得多。
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VSMC细胞株复苏失败原因分析
VSMC细胞株复苏失败原因分析素尔细胞库提供遗传变异细胞系、正常组织来源细胞系、肿瘤细胞系、工程细胞系、干细胞系，涉及人类，大鼠、小鼠、鸟类、仓鼠、鱼类、猫类、狗、牛、貂、猪、恒河猴、长鼻袋鼠等。产品名称：VSMC细胞中文名称：大鼠胸主动脉平滑肌细胞种属：大鼠来源：胸主动脉平滑肌培养条件：DMEM生长状态：贴壁VSMC细胞株复苏失败原因分析细胞的冻存与复苏为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，最佳的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(－70℃~－196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在－70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键，在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。一、细胞的冻存：为避免污染造成的损失，最小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化，需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前，细胞应该特性化并检查是否污染。有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基，成分可能如下：包含10％甘油的完全培养基，包含10％二甲基亚砜（DMSO）的完全培养基，50％ 细胞条件培养基和50％含有10％甘油的新鲜培养基，或50％ 细胞条件培养基和50％含有10％二甲基亚砜的新鲜培养基。对于无血清培养基，一些普通的培养基成分可能是：50％ 细胞条件无血清培养基和50％包含有7.5％二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基，或包含有7.5％二甲基亚砜和10％细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。VSMC细胞株复苏失败原因分析CEK& 鸡胚肾细胞 &&&&&&&& 鸡&&&& 胚肾&&&&&&&& DMEM&&&& 贴壁NCI-H1770&&&&&& 人非小细胞肺癌细胞&&&& 人&&&& 非小细胞肺癌；淋巴结转移；男性&&&& 1640&&&&&&&& 悬浮NCI-H1092&&&&&& 人小细胞肺癌细胞&&&&&&&& 人&&&& 非小细胞肺癌；骨髓转移；男性&&&&&&&& 1640&&&&&&&& 贴壁KYSE30&&&& 人食管鳞癌细胞&&&& 人&&&& 食管鳞癌；男性&&&& EMEM&&&&& 贴壁Mv-4-11&& 人急性单核细胞白血病细胞&&&&&&&& 人&&&& 急性单核细胞白血病；男性&&&&&&&& 1640&&&&&&&& 悬浮RPMI8226&&&&&&& 人多发性骨髓瘤细胞&&&& 人&&&& 浆细胞骨髓瘤；男性&&&& 1640&&&&&&&& 悬浮NALM-6&& 人急性B淋巴白血病细胞&&&& 人&&&& 急性B淋巴细胞白血病；男性&&&& 1640&&&&&&&& 悬浮Nthy-ori3-1&&&&&& 人甲状腺正常细胞&&&&&&&& 人&&&& 甲状腺；SV40转化；女性&&& F12K&&&&&&&&& 贴壁FHC& 人正常结直肠粘膜细胞&&&&&&&& 人&&&& 胎儿；结肠；自发永生；男性&&&& 1640&&&&&&&& 贴壁FLS&& 大鼠成纤维样滑膜细胞&&&&&&&& 大鼠&&&&&&&& 滑膜&&&&&&&& DMEM&&&& 贴壁HFL& 人成纤维样滑膜细胞&&&& 人&&&& 滑膜&&&&&&&& 1640&&&&&&&& 贴壁HLEB3&&&&& 人晶状体上皮细胞系&&&& 人&&&& 晶状体；Ad12-SV40转化；男性& DMEM&&&& 贴壁HN13&&&&&&& 人口腔鳞状细胞癌细胞&&&&&&&& 人&&&& 舌鳞癌；女性&&&&&&&& EMEM&&&&& 贴壁RLE-6TN&& 大鼠肺上皮Ⅱ型细胞&&&& 大鼠&&&&&&&& 肺；上皮细胞；Fischer 344& DMEM&&&& 贴壁PA-TU-8988S&&& 人胰腺癌细胞&&&&&&&& 人&&&& 胰腺癌；女性&&&&&&&& DMEM&&&& 贴壁HEEC&&&&&&& 人正常食管上皮细胞&&&& 人&&&& 食管；上皮细胞&&&& 1640&&&&&&&& 贴壁MES-SA&&& 人子宫肉瘤细胞&&&& 人&&&& 子宫肉瘤；女性&&&& McCoy&s 5a&& 贴壁MCFs&&&&&&& 小鼠心肌成纤维细胞&&&& 小鼠&&&&&&&& 心肌；成纤维细胞&&&&&&&& 1640&&&&&&&& 贴壁EHEB&&&&&&& 人慢性B细胞白血病细胞&&&& 人&&&& B细胞白血病；女性&&&&& 1640&&&&&&&& 悬浮SNK6&&&&&&&& 人NK/T细胞淋巴瘤细胞&&&&&& 人&&&& NK/T细胞淋巴瘤；男性&&&&&&& 1640&&&&&&&& 悬浮PIG1&&&&&&&&& 正常人皮肤黑色素细胞&&&&&&&& 人&&&& 皮肤；黑色素细胞；HPV16转化；男性&&&& 1640&&&&&&&& 贴壁hTERT-RPE1&&&& 人视网膜色素上皮细胞&&&&&&&& 人&&&& 视网膜色素上皮；hTERT永生；女性 DMEM&&&& 贴壁ARPE-19/APRE-19&&& 人视网膜色素上皮细胞&&&&&&&& 人&&&& 视网膜色素上皮；自发永生&&&&&&&& DMEM&&&& 贴壁HO8910PM&&&&& 人卵巢癌细胞&&&&&&&& 人&&&& 卵巢癌；女性&&&&&&&& 1640&&&&&&&& 贴壁IPI-2I&&&&&&&& 猪回肠上皮细胞& 猪&&&& 肠；上皮细胞；SV40转化&&& 1640&&&&&&&& 贴壁RT4-D6P2T&&&&&& 大鼠神经雪旺氏细胞&&&& 大鼠&&&&&&&& 恶性神经鞘瘤；BDIX&&&& DMEM&&&& 贴壁HUVEC&&&& 人脐静脉血管内皮细胞&&&&&&&& 人&&&& 脐静脉；内皮细胞&&&&&&&& DMEM&&&& 贴壁HTR8-Svneo&&&& 人绒毛膜滋养层细胞&&&& 人&&&& 绒毛膜滋养层&&&&&&&& 1640&&&&&&&& 贴壁KG-1a&&&&&&& 人急性骨髓白血病细胞&&&&&&&& 人&&&& 急性髓系白血病；男性&&&&&&&& IMDM&&&&& 悬浮OCI-AML3&&&&&&&& 人急性髓细胞性白血病细胞&&&&&&&& 人&&&& 急性髓系白血病；男性&&&&&&&& IMDM+20%&&&& 悬浮1、悬浮细胞计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约200～400g离心5分钟沉淀细胞，使用移液管移去上清到最小体积，不要搅乱细胞。以1&107到5&107细胞/ml密度，在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞，或者以0.5&107到1&1027在无血清培养基中，再次悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿冰上或放入4℃冰箱中，5分钟内开始冷冻步骤。细胞以1℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。2、贴壁细胞使用分离试剂从基层分离细胞，分离时尽可能温和，使对细胞的损伤减少到最小。在完全生长培养基中，再次悬浮分离细胞，确定有活力细胞数。以大约200g离心5分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到最小体积，不要搅乱细胞。以5&106到1&106细胞/ml密度，在冻存液中悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿的冰上或放入4℃冰箱中，5分钟内开始冷冻步骤。细胞以1℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。VSMC细胞株复苏失败原因分析&
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VSMC中F-actin比例增加具有相关关系为了明确SM22αC端功能域是否具有促进F-actin体外交联的作用，将GST-SM22α蛋白纯品与F-actin共孵育，SDS-PAGE和电镜观察均可检测到沉淀中交联的F-actin，表明SM22α可通过C端功能域促进F-actin发生体外交联为了进一步探明内源性SM22α是否与actin结合，以抗SMα-actin抗体进行免疫沉淀，得到的蛋白A-抗原-抗体三元复合物中可以检测到SM22α的存在，且随着血清饥饿时间的延长，结合在actin上的SM22α明显增多以上结果表明，SM22α通过与F-actin结合参与VSMC表型转化过程中细胞骨架的重构 2.4细胞代数影响VSMC骨架重构和SM22α分布我们在研究过程中发现，在细胞传代次数和密度不同的条件下，收缩型VSMC的收缩反应性存在差异为了进一步明确细胞代数、密度与VSMC的收缩反应性之间的关系及其内在机制，分别将生长至不同密度30％～50％汇合或超汇合的3代和8代细胞进行血清饥饿，以收缩反应性及细胞骨架微丝聚合为指标观察VSMC再分化情况蛋白分步提取和Westernblot检测F-actin组分G-actin组分中收缩蛋白含量的变化，分析不同代数、密度的细胞收缩反应性及其与F-actin聚合和交联的特征，探讨SM22α在不同actin组分中的分布与细胞骨架重构的关系结果发现，血清饥饿诱导后，低代数3代、高密度超汇合的VSMC微丝排列呈极性、粗大、束状平行的应力纤维，兴奋剂诱导的细胞收缩明显增强蛋白分布提取和Westernblot分析表明，血清饥饿处理可明显诱导actin聚合为F-actin，并伴有SM22α在F-actin中的富集，该效应与细胞的收缩反应性有一致关系，随着细胞传代次数的增多，该效应逐渐减弱而收缩蛋白SM1-MHC和SM2-MHC在不同actin组分中的分布可能与细胞密度有关 结论1.成功构建了GST-SM22α融合蛋白大肠杆菌表达系统，获得电泳纯的GST-SM22α融合蛋白，制备了兔抗SM22α多克隆抗体 2.证实含SM22αCH-C端和CLR结构域肽段具有与F-actin结合和促F-actin交联的活性，SM22α可通过CH-C端和CLR结构域肽段与actin相互作用而参与VSMC细胞骨架重构 3.细胞传代次数和生长密度通过改变不同收缩蛋白的比例而影响VSMC细胞骨架重构，SM22α通过促进F-actin聚合和应力纤维形成来调节VSMC收缩性
三亿文库包含各类专业文献、行业资料、中学教育、各类资格考试、专业论文、动脉粥样硬化术后再狭窄血管平滑肌细胞平滑肌22α细胞骨架肌动蛋白微丝病理生理45等内容。　
　血管平滑肌异常增殖导致的血管重构是 PCI 术后再狭窄...其中 α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, ...而在动脉粥样硬化中 的表达程度则随粥样硬化程度的... 　肌动蛋白细胞骨架调节通路、 Apoptosis 、磷脂酰肌醇...可直接导致人类主动脉血管平滑肌 细胞更倾向于钙化,...再狭窄和病理性血管重塑而作为致动脉粥样硬化因素而... 　对大鼠肥厚心肌组织肌球蛋白重链 α 基因表达的调控...动脉重建术后再狭窄相关 miRNA 表达谱分析及靶基因...基因敲除小鼠血管平滑肌细胞中 miR-133a 及其 靶... 　B.血管内皮细胞C.平滑肌细胞D.淋巴细胞正确答案及相关解析
正确答案 A,C
解析 按动脉粥样硬化的内皮损伤学说,泡沫细胞来源于单核细胞和平滑肌细胞,分别称单... 　如今,动脉粥样硬化性心脑血管疾病是危害人 类健康最...氧化的细胞包括内皮 细胞、平滑肌细胞、单核细胞、...内皮细胞参与细胞骨架构成的 微丝明显破坏、断裂、... 　解析 本题考点:动脉粥样硬化。与动脉粥样斑块形成关系密切的细胞包括血小板、内皮细胞、平滑肌细胞、淋巴细胞和单核细胞。成纤维细胞与动脉粥样硬化斑块形成无关。最新... 　在动脉粥样硬化的病变早期,最早迁入病变处血管内膜的细胞是() A.平滑肌细胞 B.淋巴细胞 C.纤维母细胞 D.单核细胞 E.内皮细胞正确答案及相关解析
正确答案 D... 　动脉粥样硬化脂纹病变中主要的细胞成分是 A.单核细胞B.T淋巴细胞C.泡沫细胞D.平滑肌细胞E.中性粒细胞正确答案及相关解析
正确答案 C
解析 暂无解析 ... 　动脉粥样硬化的早期病变中,下列哪一种细胞最早迁入内膜 A.平滑肌细胞B.淋巴细胞C.单核细胞D.中性粒细胞E.嗜碱性粒细胞 正确答案及相关解析
正确答案 C}