东北师站大学生物基础实验教学中心生物化学实验——电泳技术张丽萍魏春雁-AX. —1— 刖B. 1937年，瑞典科学家Tiselius设计了世界上第一台 电泳仪，建立了移界电泳法，并于1948年荣获诺贝 尔奖。70年以来，电泳技术围绕制胶、电泳、染色 三个技术环节，不断改进，以实现下列目标：1、 提高分辨率及灵敏度。2、 简化操作，缩短电泳时间。3、 扩大应用范围。■各类电泳技术已广泛应用于生命科学各个领域。教学目的■掌握电泳技术的基本原理。■掌握PAGE不连续系统分离血清Pr的原理与技术。■掌握酶活性染色法, 氢酶同工酶的原理。鉴定过氧化物酶同工酶 乳酸脱■掌握SDS测定蛋白质分子量的原理和技术。.学习电泳前沿技术等电聚焦电泳、双向凝胶电泳电 泳、毛细管电泳原理及应用。■ 了解电泳相关技术的原理及应用。凝胶成像技术 凝胶印渍转移技术 凝胶干燥技术 凝胶扫描技术目录电泳技术的基本原理■ 1■ 2■ 3■ 4■ 5■ 6■ 7PAGE不连续系统分离Pr的原理醋酸纤维素薄膜电泳分离血清清蛋白? PAGE分离血清蛋白鉴定乳酸脱氢酶同工酶 酶活性染色法鉴定过氧化物酶同工酶 SDS测定蛋白质分子量? 等电聚焦电泳@1'1!1!1!双向凝胶电泳，目录. 9.高效毛细管电泳(HPCE)■ 10.电泳相关技术 (凝胶成像技术、凝胶印渍转移技术、凝胶干燥技术、凝胶扫描技术)■ 11.注意事项@■ 12 .参考文献L电泳技术的基本原理■电泳：带电粒子在电场中的定向移动。L电泳技术的基本原理vuE『：泳动速度cm/秒or分":泳动距离cm〃:泳动率or泳动度（cm/伏?秒or分）〃:电压常压（100—500v）-：电泳时间（秒/分）高压（500—10000V）仅需几分钟丿：支持场的长度（有效长度）E：电场强度伏特/cmL电泳技术的基本原理■影响泳动率U的因素内因：1.净电荷2. 质点大小3. 质点形状外因：1. V ( U/L)2. 缓冲液的pH (pH恒定)3. 离子强度［I］最适：0. 02-0. 24. 电渗：液体对固体支持物的相对移动L电泳技术的基本原理■电泳类型⑴区带电泳纸电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、粉末电泳、细丝 电泳、凝胶电泳。凝胶电泳包括：琼脂糖凝胶 聚丙烯酰胺凝胶电泳包括］、淀粉凝月初硅胶凝胶、聚丙烯酰胺凝胶 +CH2=CH—cCH-[CH丙烯酰胺 N,N-甲叉（亚甲基）双丙烯酰胺 聚丙烯酰胺2 .聚丙烯酰胺凝胶电泳原理■三种物理效应⑴样品浓缩效应⑵分子筛效应⑶电荷效应2 .聚丙烯酰胺凝胶电泳原理■样品浓缩效应：由凝胶系统的不连续性产生。① 凝胶孔径不连续性② 缓冲液离子成份的不连续性③ PH的不连续性2 .聚丙烯酰胺凝胶电泳原理■①凝胶孔径不连续性单体浓度7(%)=竺?i竺? X100% Og2. 5g2. 5%电冰技木2 .聚丙烯酰胺凝胶电泳原理■凝胶浓度(T)的选择与被分离物质分子量密切相关。分子量范围适用的凝胶浓度/ (%)蛋白质<10

　　我老是记不住,很重要的一个公式.二元一次方程的两根的平方和为多少?即X1平方+X2平方+?那上面有点打错了是X1平方+X2平方=?