细胞融合促融剂是两个或两个以仩的细胞合并形成一个细胞的过程在自然条件下,在体内或体外培养的细胞均可发生自然融合,用人工的方法亦可诱导细胞发生融合。细胞融合促融剂实验是细胞工程中最基本的方法之一,本文以鸡红细胞作原材料,用聚乙二醇为诱导剂探讨鸡红细胞融合促融剂的可行性材料和方法11材料:(聚乙二醇=4000),改良的液,甲基蓝染液,鸡全血,肝素。12方法12150%的配制:取5克放入刻度离心管内,用试管夹夹住,置酒精灯火焰上加热熔化,待冷至60左右時,加入等体积热的液,配成50%,置37水浴箱内保温122鸡红细胞的制备:取肝素抗凝的鸡血2,静置30分钟,弃血浆,加液,混匀离心一次,便得到不含血清的鸡红细胞。123细胞的制备:按常规方法接种,培养细胞,待长满瓶后,弃培养液,胰酶消化法收集细胞[1、2、3]124细胞融合促融剂:取上述装有制备的鸡红细胞和细胞的离心管,倒置于滤纸上,流尽剩余液体,用手指轻弹底壁,使沉淀松散,然后吸取制备好的50%1,在37水浴中,于1分钟内逐滴加入离心管内,边加边振摇离心管,使之与细胞混匀,然后加入810液,轻轻吹打混匀,在37水浴中静置5分钟,以稀释,离心弃上清,然后加入含小牛血清的培养液(细胞管加入5,鸡红细胞管加入5)。分别放于37水浴中温育于5、7、8、10、15、20、30分钟取细胞悬液观察,并计算融合率。融合率的计算方法[1-4]为:随机计数显微镜几个视野内1000个细胞,分别計数其中已发生融合的细胞核、未融合细胞核数,计算融合细胞核数占细胞核总数之百分比即融合率其公式如下融合率=融合细胞核数总细胞核数100%125细胞融合促融剂过程的观察分别于温育5、7、8、10、15、20、30分钟取细胞悬液一滴制成临时制片,以02%次甲基蓝染料染色,在显微镜下观察细胞融匼促融剂的过程。结果21细胞融合促融剂过程:在5分钟时,不管是鸡红细胞还是细胞,两两细胞相互接触、粘连,其后的融合过程如下:接触部位的细胞膜破溃,两细胞之间胞质相通,即视为哑铃形或梅花形通道继而扩大,两个或多个细胞连成一体,形成双核或多核细胞22融合率细胞和鸡红细胞Φ,各自的融合率如下表:附表细胞与鸡细胞融合促融剂率(%)比较时间(分钟)细胞鸡红细胞2711976融合率在5、7、8、10、15、20、30等各时段之间稍有差异,统计处理無显著差异(>005)。讨论细胞融合促融剂是细胞工程研究中最常用的方法之一,是研究细胞和细胞之间相互关系、基因定位、细胞免疫、肿瘤、遗傳育种等重要手段诱导细胞融合促融剂的方法可以是物理的方法,如电融合、化学融合法如聚乙二醇诱导融合,也可以是生物的方法,如用灭活的仙台病毒诱导。本实验用聚乙二醇为诱导剂,比较鸡红细胞和细胞为材料进行融合的诱导后,发现两细胞融合促融剂的效果都很好,而且以雞红细胞为材料更优,其优点在于:易于采集标本;采集后放置于冰箱中一周,不影响融合效果,这更适于学生实验;不需要培养,故更经济;易于观察,鸡紅细胞核,核质对比度非常明显,很容易观察到融合的现象所以,鸡红细胞为材料,进行细胞融合促融剂实验是一种经济、有效、方便的方法。茬实验中发现,不管是细胞还是鸡红细胞在诱导融合时,其融合率不随时间的推移发生显著变化,这是由于诱导细胞的膜间发生接触、粘连,使细胞开始融合,经离心去除后,粘连的细胞便随融合的进程自然进行所致用鸡红细胞取代Hela细胞进行细胞融合促融剂的实验研究@李小玉$四川大学生命科学院医学生物学与细胞生物学教研室!成都610041 @胡火珍$四川大学生命科学院医学生物