反义寡聚核苷酸酸定点诱变技术谁是发明的？

点击联系发帖人 时间：2019-08-02 19:52

寡聚核苷酸

寡核苷酸是一类只有20个以下碱基的短链核苷酸的总称（包括脱氧核糖核酸DNA或核糖核酸RNA内的核苷酸），寡核苷酸可以很容易地和它们的互补对连结所以常用来作为探针確定DNA或RNA的结构，经常用于基因芯片、电泳、荧光原位杂交等过程中

作为探针确定DNA或RNA的结构

基因芯片、电泳、荧光原位

寡核苷酸合成的DNA（脫氧核糖核酸）可以用于链聚合反应，能扩增确定几乎所有DNA的片段在这个过程中寡核苷酸是作为引物，和DNA 中标的的互补片段结合作成DNA嘚复制品。

反义寡聚核苷酸酸调控寡核苷酸

调控寡核苷酸用於抑制RNA片段防止其翻译成蛋白，在制止癌细胞活动方面能起一定的作用

反義寡聚核苷酸酸定点诱变技术

的生物化学家M·史密斯（Michael Smith，1932—）发明的其基本原理如下：

应用反义寡聚核苷酸酸进行DNA的定点诱变时，首先偠把含有待突变的DNA片断段克隆到MI3噬菌体载体中MI3噬菌体的正链可以感染具有纤毛的细菌，并在细菌体内进行复制后以出芽的形式形成新嘚带有正链DNA的噬菌体。而存留在菌体内的则是双链状态的复制型MI3受MI3噬菌体感染的细菌长生速度减慢，在细菌培养皿上会形成透明的噬菌斑

将目的DNA插入到复制型MI3的多克隆位点上，去转染

提取单链DNA作为突变的模板。根据需要设计并合成带有突变核苷酸序列的反义寡聚核苷酸酸引物使与带有目的DNA的单链MI3模板杂交，然后加入DNA聚合酶和4种脱氧核糖核苷酸使杂交上的突变引物延伸，并用DNA连接酶使新合成的

成环狀再去转染细菌。可用DNA序列分析的方法从所得到的噬菌体中筛选出带有突变DNA序列的突变体在制备出含有突变体的复制型DNA后，可以用突變的DNA片段置换未突变的DNA相应的区段从而得到完整的DNA突变体。

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寡核苷酸合成的DNA（脱氧核糖核酸）可以用于链聚合反应能扩增确定几乎所有DNA的片段，在这个过程中寡核苷酸是作为引物和DNA 中标的的互补片段结合，作成DNA的复制品

调控寡核苷酸/反义寡聚核苷酸酸

调控寡核苷酸用於抑制RNA片段，防止其翻译成蛋白在制止癌细胞活动方面能起一定的作用。

定点诱变技术/反義寡聚核苷酸酸

是由加拿大的生物化学家M·史密斯（Michael Smith1932—）发明的。其基本原理如下：

应用反义寡聚核苷酸酸进行DNA的定点诱变时首先要紦含有待突变的DNA片断段克隆到MI3噬菌体载体中，MI3噬菌体的正链可以感染具有纤毛的细菌并在细菌体内进行复制后，以出芽的形式形成新的帶有正链DNA的噬菌体而存留在菌体内的则是双链状态的复制型MI3。受MI3噬菌体感染的细菌长生速度减慢在细菌培养皿上会形成透明的噬菌斑。

将目的DNA插入到复制型MI3的多克隆位点上去转染细菌，提取单链DNA作为突变的模板根据需要设计并合成带有突变核苷酸序列的反义寡聚核苷酸酸引物，使与带有目的DNA的单链MI3模板杂交然后加入DNA聚合酶和4种脱氧核糖核苷酸，使杂交上的突变引物延伸并用DNA连接酶使新合成的DNA成環状，再去转染细菌可用DNA序列分析的方法从所得到的噬菌体中筛选出带有突变DNA序列的突变体。在制备出含有突变体的复制型DNA后可以用突变的DNA片段置换未突变的DNA相应的区段，从而得到完整的DNA突变体

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