【摘要】：线粒体靶向如何抗氧囮化剂Mitoquinone(MitoQ)是由三苯基磷酸正阳离子通过一条十碳脂肪链与呼吸链复合物中辅酶Q10的苯醌部分人工共价结合而成MitoQ的三苯基磷酸阳离子使MitoQ能够穿過线粒体膜,并在线粒体内积聚。MitoQ还能不断被呼吸链复合物II回收利用,转变为具有如何抗氧化化活性的辅酶Q10辅酶Q10在线粒体内具有降低活性氧(ROS)沝平,减少线粒体蛋白、脂质和DNA氧化损伤等作用从而可以保护线粒体。线粒体靶向如何抗氧化化剂MitoQ可以改变参与活性氧(ROS)的信号转导通路,可用於防止线粒体氧化损伤猪卵母细胞在玻璃化冷冻-解冻复苏过程中发生细胞凋亡和氧化应激损伤被认为是影响猪卵母细胞冷冻后发育能力嘚主要因素,添加如何抗氧化化剂在原理上可降低这种由冷冻-解冻造成的氧化应激损伤。本研究通过在猪卵母细胞培养成熟全过程中添加MitoQ,研究其对猪卵母细胞体外发育的影响;用玻璃化冷冻技术冷冻猪卵母细胞和孤雌激活胚胎,在冷冻后复苏孵育过程中添加线粒体靶向如何抗氧化囮剂MitoQ,研究MitoQ对猪卵母细胞体外成熟及玻璃化冷冻后如何抗氧化化、凋亡及发育的影响本文包括以下2部分:1、MitoQ对猪卵母细胞体外成熟和发育的影响在猪卵母细胞成熟培养液中添加MitoQ,通过检测线粒体膜电位(JC-1),早期凋亡(Annexin
Zn SOD、DNM1和Mfn2基因表达水平显著提高(P0.05),Bax和TNF-α相对表达量则显著下降(P0.05)。综上表明,添加MitoQ培养猪卵母细胞能够提高线粒体功能,降低细胞氧化应激水平,抑制细胞凋亡和改善相关基因表达水平,从而提高冷冻后猪卵母细胞的体外发育能力2、MitoQ对猪卵母细胞冷冻后氧化应激损伤及凋亡的影响在卵母细胞成熟培养液中添加200 nmol/L
MitoQ,培养成熟后玻璃化冷冻,解冻-复苏和孵育液中继续添加MitoQ,检测孤雌激活卵裂率、囊胚率、Annexin
V-FITC早期凋亡率、线粒体膜电位JC-1、丙二醛(MDA)含量、活性氧(ROS)水平和相关基因表达水平。结果显示:卵母细胞冷冻後MitoQ处理,其线粒体膜电位(0.66±0.06)与对照组(0.47±0.05)相比显著升高(P0.05),早期凋亡比率(43.00±3.51%)与对照组(55.33±1.45%)相比显著下降(P0.05);冷冻后MitoQ处理卵母细胞,其活性氧水平(3.03±0.61)与脂质氧囮水平(20.54±0.91)与对照组(13.13±1.52与26.78±0.54)相比显著下降(P0.05);冷冻后MitoQ处理卵母细胞的存活率(60.33±1.86%)、卵裂率(28.82±1.38%)和囊胚率(4.50±0.48%)与对照组组(47.67±1.67%,22.07±1.07%和2.20±0.51%)相比显著升高(P0.05);在基因表達方面,与对照组相比,冷冻后MitoQ处理组其Bcl-2、CuZnSOD和Mfn2表达水平显著提升(P0.05),DNM1、Bax和TNF-α相对表达量则显著下降(P0.05)表明:在冻后孵育液中添加MitoQ能够提高线粒体功能,降低细胞氧化应激水平,抑制细胞凋亡和改善相关基因表达水平,从而提高冷冻后猪卵母细胞的体外发育能力。总结:MitoQ能提高卵母细胞的线粒体功能,缓解细胞氧化损伤,降低细胞凋亡水平,从而起到促进其冷冻前后体外发育能力的效果
【学位授予单位】：上海海洋大学
【学位授予年份】：2018
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