酸枣仁与滇枣仁镇静催眠作用成分_皂苷及黄酮苷含量的比较研究_百度文库
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酸枣仁与滇枣仁镇静催眠作用成分_皂苷及黄酮苷含量的比较研究
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你可能喜欢本人服用刺五加片&的亲身临床感受&&是失眠者的福音
功效与作用
主治：风寒湿痹，筋骨挛急，腰痛，阳痿，脚弱脚气，疮疽肿毒，跌打劳伤。益气健脾，补肾安神。对于脾肾脏阳虚，体虚乏力，食欲不振，腰膝酸痛，失眠多梦尤为有效。
&& 味辛、微苦、性微温。归脾、肾、心经。
功能：近代医学研究证明刺五加的作用特点与人参基本相同，具有调节机体紊乱，使之趋于正常的功能。有良好的抗疲劳作用，较人参显著，并能明显的提高耐缺氧能力。补中、益精、强意志、祛风湿、壮筋骨、活血去瘀、健胃利尿等功能。久服"轻身耐劳"。
刺五加含有值得注意的成分---刺五加甙，其能刺激精神和身体活力。众多关于刺五加的科学出版物已证明了其抗疲劳作用，增强持久力和能力，增加机敏和学习能力。众多用法都已在人体实验中得到了证实。刺五加是病后康复，承受过多压力或紧张，工作过量，慢性病导致身体虚弱的人群以及那些需要达到生理和心理性能高峰的人中非常受欢迎的自我药疗药物。目前同样有相当可观数量的报道指出其具有支援免疫系统，恢复非正常低血压，改善循环系统，使紊乱的糖脂代谢正常化，肝部，睾丸，骨密度和其它重要器官的合成代谢的功效。
预防压力所至疾病
刺五加含有刺五加甙，其对肾上腺具有良好的作用，这个微小的腺体位于肾上部并分泌抵抗疲劳的荷尔蒙。服用刺五加被认为可推进机体解决从热暴露到工作过度的生理压力。并且增强抵御疾病能力。以及人体的全面精力水平。
2.抵抗疲劳和恢复精力
刺五加甙显示出可提高敏锐度和物理耐力，却没有含咖啡因产品具有的效力减退。研究显示刺五加甙可改善运动肌肉对氧的使用。这意味着人体可维持更久的有氧运动并更快从运动疲劳中恢复。苏联的初步研究显示其在该用途上可能是十分有效的。
3.刺激机体免疫力
刺五加提取物显示可刺激细胞免疫力。研究发现其可刺激T-细胞产生，特别是助手细胞。因此刺五加被用于多种免疫相关疾病。德国科学家曾发现该草药可能对治疗AIDS的早期阶段有很大帮助。研究发现其可通过上升数量的助手细胞和细胞毒素T细胞的协作作用来减缓病毒的扩散。
《本草纲目》
刺五加见于《神农本草经》，列为上品。上品乃指无毒，久服可以轻身、延年益寿而无害。刺五加自古即被视为具有添精补髓及抗衰老作用的良药。商品名为五加参，原主产于黑龙江省山区，地方土名习称“老虎潦”，在日本则称为虾夷五加，而在前苏联又称为西伯利亚人参。
明朝李时珍《本草纲目》称刺五加，以五叶交加者良，故名五加，又名五花。五加治风湿，壮筋骨，其功良深，宁得一把五加，不用金玉满车，又“文章作酒，能成其味，以金买草，不言其贵”之说，对五加做了很高的赞誉。
《名医别录》认为五加有「补中，益精，坚筋骨，强意志」等功效。
刺五加于《实用补养中药一书》中记载，属于补气药，具有补虚扶弱的功效，可来预防或治疗体质虚弱之症候，滋补强壮，延年益寿。
正式学名为 Eleu-therococcus senticosus (Ruper.et Maxim.)Maxim.
为最早公开使用之名称。保留学名为 Acanthopanax Senticosus (Ruper.et Maxim.)Harms.
为最早之植物名，目前仍广泛被中国科学家使用。第一学名为 Eleutherococcus senticosus Extract。
落叶灌木，高1～6m。茎密生细长倒刺。掌状复叶互生，小叶5，稀4或3，边缘具尖锐重锯齿或锯齿。伞形花序顶生，单一或2～4个聚生，花多而密；花萼具5齿；花瓣5，卵形；雄蕊5，子房5室。浆果状核果近球形或卵形，干后具5棱，有宿存花柱。花期6～7月，果期7～9月。生于山地林下及林缘。主产于东北地区及河北、北京、山西、河南等地。
春、秋季采挖，去泥土，晒干。
从刺五加根茎中分离得到七种配醣体(刺五加甘Elentheroside)，A、B、C、D、E、F、G七种。Eleutheroside于根部含
0.6-0.9 ％，于茎部含 0.6-1.5 ％，此外还含有 polysaccharide 和 isoflavonoid 。
糖类的还原基中，酒精、、基等所结合成的化合物，即总称为，它对于人体之健康维持有帮助。
经过研究分析主要成份含：多种醣类、、、、B1、B2及多量的胡萝卜素；另含有芝麻脂素、甾醇、、、、非芳香性不饱和有机酸、及多种微量矿物质等。
刺五加甘A为胡萝卜素，人蔘中也含这类成分。在人体内能促进胆固醇的排泄，可防治血液中胆固醇含量过高症。
刺五加甘B为紫丁香素（ Syringin
），是刺五加的主要强壮成分，有促性腺、抗辐射、抗疲劳等作用，具有与人蔘皂素相似的生理活性。成分为：
1.刺五加含超氧化歧化酵素SOD (Superoxide
dimutase）复合物，SOD具有良好的抗氧化功能，可以增强人体免疫以及抵抗自由基攻击的效果，具有抗氧化作用，可增强人体免疫力、防止老化及促进健康。
2.刺五加亦含有丰富的维他命以及矿物质。经过研究分析，刺五加中含有维生素Ａ、Ｂ1、Ｂ2及Ｃ等维生素，以及、、、、、、、、、等矿物质成分。
3.含有丰富的、、。并且在配类糖体的还元基中（酒精、乙醇、等有机化合物结合成的化合物），还具有刺激性的作用，以及镇静和调整心肌能力的作用喔！
4.另含有芝麻脂素、木栓酮、皂甘、真皮素、刺五加甘、非芳香性不饱和有机酸等物质。芝麻脂素（Sesamin），这成份具有止咳、袪痰效
果，也有抗结核杆菌的作用。
刺五加C为乙基半乳糖PM。刺五加甘D及E为紫丁香树脂酚 (Syringaresinol)
的双醣PM。
其主要活性成分被认为是刺五加甙B和刺五加甙E。
根茎结节状不规则圆柱形，直径1.4～4.2cm；表面灰褐色，有皱纹；上端有不定芽发育的细枝。根圆柱形，多分枝，常扭曲，长3.5～12cm，直径0.3～1.5cm；表面灰褐色或黑褐色，粗糙、皮薄，剥落处呈灰黄色。质硬，断面黄白色，纤维性。有特异香气，味微辛、稍苦、涩。
每天可服用2-3克干燥，粉末状的根和根状茎。以刺五加甙B和E为标准的浓缩固体提取物每天服用300-400mg也比较合适，也可服用酒精提取物，8-10ml分2-3次服用。历史上，一般持续服用刺五加甙六至八个星期，然后停止一至二星期再恢复服用。
刺五加浸膏
刺五加浸膏和刺五加粉
中药名称：
拼音名：Ciwujia Jingao
英文名：EXTRACTUM ACANTHOPANACIS SENTICOSI
性状：黑褐色的稠膏状物；具刺五加特殊香气，味略苦涩。
鉴别：取本品0.5g，加乙醇20ml使溶解，滤过。取滤液1ml ，加 3％碳酸钠溶液1ml
与新制的重氮对硝基苯胺试液1～2滴，即显红色；另取滤液1ml ，加
5％亚硝酸钠溶液3～5滴与10％硝酸铝溶液3～5滴，稍放置，加氢氧化钠试液2ml,即显红棕色。
处方：刺五加 (粗粉)1000g　75％乙醇适量
制法：取刺五加粗粉，加7 倍量的75％乙醇，加热连续回流提取12小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩成浸膏50g,即得。
检查：方法有两种。一、干燥失重：取本品0.5g，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过20.0％（附录Ⅸ
G）。二、铁盐：取本品0.5g，置坩埚中，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加0.5ml
使湿润，用小火加热至硫酸蒸气除尽，在500～600℃炽灼使完全灰化，放冷，加盐酸1ml
与水15ml，搅拌使溶解，移置50ml钠氏比色管中，加水稀释至35ml，依法检查，如显色，与标准铁溶液1.5ml
用同一方法制成的对照溶液比较，不得更深(0.003％)。
浸出物：取本品约2.5g，精密称定，照浸出物测定法项下的热浸法测定，用甲醇50ml作溶剂，浸出物不得少于60.0％。
功能与主治；同刺五加。
用法与用量：口服，一次0.3～0.45g，一日3 次。
贮藏：密封。
关于服用刺五加的副作用报道极少。无论如何，副作用通常在较高剂量（每天三次，每次4.56ml）时出现，其中包括失眠，过敏，忧郁和焦虑。患有风湿性心脏病的志愿者报道在使用刺五加后会出现心包疼痛，头痛，心悸和血压上升。极少数使用者会出现短暂的轻微。
在动物身上进行的毒理实验已证实刺五加提取物事实上是无毒的。刺五加33%乙醇提取物的LD50（50%致死剂量）为14.5ml/kg或20.0ml/kg。而且在以日常剂量5.0ml/kg服用刺五加33%乙醇提取物的小鼠身上没有发现任何长期毒性。人体研究已证实刺五加提取物（33%乙醇）是非常容易承受而且其副作用非常罕见。
为五加科植物刺五加、的嫩茎叶。无梗五加叶为灌木，高至4米，枝上有锥形硬刺或无刺。花暗紫色，几无柄。果黑色，阔椭圆形，长1-1.4厘米。花期8月。分布东北等地。采收春季初发的嫩茎叶，入沸水锅焯过，清水浸泡，炒食或做汤，也可晒干菜。
刺五加叶含多种刺木骨甙，每百克可食部含胡罗卜素5.4毫克，维生素B2 0.52毫克，维生素C
121毫克等。无梗五加叶含强心甙0.228%，挥发油0.1%，还有皂等。
功效：[日华子本草]载：“治皮肤风，可作蔬菜食。”生草药性备要]载：“熬跌打，消肿痛”。
(1)凉拌五加叶：嫩五加叶250克，配以精盐、、蒜、麻油等制成。含有丰富的胡罗卜素、维生素C，有增强身体防病能力的作用，强身健体。
(2)五加叶鸡汤：嫩五加叶150克，鸡蛋2只。配以精盐、味精、葱、素油制成。适用于体虚、肿痛、咽痛、目赤，风疹等病症。
刺五加提取物
名称：刺五加提取物
规格：刺五加甙B E：0.8%，1.0%，1.2%，1.5%HPLC
1、扩张血管、降低血压、抗凝聚、改善血液流变特性和改善微循环。
2、改善高脂血症和高粘血症的血液流变特性。
3、对神经功能兴奋和抑制双向调节；镇静、抑制自发活动、、抗惊厥。
4、临床上具有抗疲劳，促进男性生殖系统健康作用。
5、治疗抑郁症、脑血栓、高血脂、底血压、冠心病、糖尿病、白细胞减少症。益气健脾，补肾安神。
6、用于脾肾阳虚、体虚乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多梦。
东北刺五加果
东北刺五加果能增加睡眠，对心悸、健忘、乏力等症状&&&&
，刺五加的作用与人参相似。刺五加有扶正固本、养血安神、滋补强壮之功能，主要药效成分含水量多种糖甙、丁香甙、香豆精甙、多糖及，是治疗体虚、咳嗽、高血压、神经衰弱等症的良药。古代曾有“宁要五加一把，不要金玉满车”之说，对刺五加给予极高的评价。
神经衰弱喝点刺五加
秋天里很多中老年人会出现体倦乏力的情况，有些人患上了神经衰弱，失眠多梦而且记忆力差。
哈尔滨医科大学附属第四医院中医专家陈建国指出，中老年人在秋天不妨服用些刺五加，对治疗神经衰弱很有好处。
刺五加的服用方法有很多，可以取几片薄片泡水代茶饮，也可以泡酒喝，对于神经衰弱严重的病人可以尝试以下的服用方法，夜交藤30克，五味子15克，合欢皮15克，菌灵芝30克(先熬)，酸枣仁15克，茯神15克，当归15克，熟地15克，刺五加30克，磁石40克，水煎服。
服用一段时间刺五加，可以起到治疗失眠、降血压、增强机体防御能力等作用。
值得注意的是，刺五加原名五加皮，分为、、三种不同药材，很容易混淆。其中，香加有祛风湿、补肝肾、强筋骨的功效，但该药有毒，易引起心肾功能损害。另外，阴虚火旺者忌用。
缓解疲劳的刺五加五味茶
原料：刺五加15g，五味子6g。
制作：将刺五加、五味子同置茶杯内，冲入沸水，加盖闷15分钟即可。当茶饮，随冲随饮，每日l剂。
功效：补肾强志，养心安神。适用于腰膝酸痛，神疲乏力，失眠健忘，注意力难以集中等症。现代研究发现，刺五加含有五加苷、、多糖等。有较好的抗衰老、抗疲劳及强壮作用。能增强体力或智力，提高工作效率，并具有调节神经系统功用。此茶配以具有养心益智的，有较好的益智强心，养心安神功效。
刺五加新用途
刺五加片为现代研制的一种常用的中成药。由刺五加一味药制成，有补中益气、健脾补肾，安神醒脑功效。传统应用于失眠梦多、体倦乏力、食欲欠佳、腰膝酸软等病症。近年来，通过临床实践，发现还有许多新功用。
1、：刺五加片每次3片，每日3次，30日为1疗程，一般治疗3－6个疗程可显效，该品能调整脏腑气血功能，改善血液循环，促进新陈代谢，使皮肤得到足够的气血运行和正常营养，从而达到润五脏、悦颜色之目的。
2、辅助治疗：口服刺五加片每次3片，每日3次，30日为1疗程。刺五加可“补中、益精，强意志”，调养心脾，对于心气虚乏所致该病有良效。
3、：每日口服刺五加片3次，每次3片，治疗90天后观察效果，其疗效明显优于服用维生素Ｃ，复合维生素Ｂ对照组。
4、足跟痛：口服刺五加片每次3片，每日3次，30天为1疗程，直到痊愈止。刺五加能“益气补肾、坚筋骨，强腰膝”，可治“两脚疼痹风弱”。
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以上网友发言只代表其个人观点，不代表新浪网的观点或立场。HPLC-MS法同时测定酸枣仁中9种成分
<meta name="keywords" content="Ziziphi Spinosae Semen; HPLC-MS; jujuboside A; jujuboside B; naringin" />
&&&&2015, Vol. 46 Issue (1): 123-127
张巧月, 杨浩天, 史贺, 张智勇, 张兰桐. HPLC-MS法同时测定酸枣仁中9种成分[J]. 中草药, ): 123-127.
ZHANG Qiao-yue, YANG Hao-tian, SHI He, ZHANG Zhi-yong, ZHANG Lan-tong. Simultaneous quantification of nine constituents in Ziziphi Spinosae Semenby HPLC-MS[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, ): 123-127.
HPLC-MS法同时测定酸枣仁中9种成分
张巧月, 杨浩天, 史贺, 张智勇, 张兰桐 &&&&
河北医科大学药学院 药物分析教研室, 河北 石家庄 050017
基金项目： 河北省自然基金-石药集团医药联合研究基金(H)
作者简介：张巧月(1990—),女,硕士研究生,从事中药质量控制与药动学研究.Tel:
通讯作者：张兰桐 Tel: (9 E-mail:
摘要：目的 建立HPLC-MS/MS法同时测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素、白桦脂酸、白桦脂醇、芦丁、芹菜素、橙皮苷、柚皮苷的量.方法 采用Sapphire C18柱(150 mm&#215;4.6 mm,5 μm),以水(1 mmol/L乙酸铵-0.1%的甲酸)-乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量1 mL/min,进样量10 μL,柱温30 ℃;采用电喷雾离子源进行负离子模式监测,多反应监测模式(MRM)用于定量分析,源喷射电压为-4 500 V,离子源温度为650 ℃.结果 9种成分的峰面积和质量浓度在测定质量浓度范围内均具有良好的线性关系,加样回收率为98.04%～101.5%,精密度RSD值为0.03%～0.74%.结论 本法简便、快速、灵敏度高、专属性好,可用于酸枣仁中9种化学成分的测定.
酸枣仁&&&&
HPLC-MS&&&&
酸枣仁皂苷A&&&&
酸枣仁皂苷B&&&&
斯皮诺素&&&&
白桦脂酸&&&&
白桦脂醇&&&&
芹菜素&&&&
橙皮苷&&&&
柚皮苷&&&&
Simultaneous quantification of nine constituents in Ziziphi Spinosae Semenby HPLC-MS
ZHANG Qiao-yue, YANG Hao-tian, SHI He, ZHANG Zhi-yong, ZHANG Lan-tong&&&&
Department of Pharmaceutical Analysis, School of Pharmacy, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, China
Abstract: Objective To develop an HPLC-MS/MS method for the determination of jujuboside A, jujuboside B, spinosin, betulinic acid, betulin, rutin, apigenin, hesperidin, and naringin in Ziziphi Spinosae Semen. Methods Analysis was performed on a Sapphire C18 column (150 mm &#215; 4.6 mm, 5 μm) eluted with acetonitrile and 0.1% methanoic acid solution containing 1 mmol/L ammonium acetate in a gradient program. The flow rate was 1 mL/min, the injection volume was 10 μL, and the column temperature was 30 ℃. The multiple-reaction monitoring scanning (MRM) was employed for the quantification with switching electrospray ion source polarity in negative mode. The ion spray voltage was set at -4 500 V and the turbo spray temperature was maintained at 650 ℃. Results The regression equations showing linear relationships between peak areas and contents of each compound were obtained. The average recoveries of the compounds ranged from 98.04% to 101.5% and the precision in terms of RSD was in the range of 0.03%—0.74%. Conclusion The method is simple, rapid, and sensitive. It could be used as a quantitative determination method for the nine components in Ziziphi Spinosae Semen.
Key words:
Ziziphi Spinosae Semen&&&&
HPLC-MS&&&&
jujuboside A&&&&
jujuboside B&&&&
spinosin&&&&
betulinic acid&&&&
betulin&&&&
apigenin&&&&
hesperidin&&&&
naringin&&&&
酸枣仁Ziziphi Spinosae Semen是《中国药典》2010年版收载的养心安神药[]，属于卫生部颁布的第一批药食同源两用品，其药用历史悠久，《神农本草经》列为上品，《本草纲目》列为本部类[]。酸枣仁味酸、性平，具有补肝宁心、镇静安神、敛汗、生津等功效，主要用于治疗虚烦不眠、惊悸多梦、体虚多汗、津伤口渴等症，是河北省道地药材[]。
酸枣仁的主要化学成分有皂苷类、黄酮类、生物碱类等。现代药理研究表明酸枣仁中皂苷类和黄酮类化合物是其镇静催眠的主要有效成分[]。其中酸枣仁皂苷A和斯皮诺素是《中国药典》2010年版所规定的酸枣仁的活性成分，白桦脂酸也以其抗肿瘤活性备受关注。目前，已有文献报道了一些酸枣仁活性成分（酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素和白桦脂酸）的测定分析方法，包括高效液相色谱（HPLC）[,,]、超高效液相色谱（UPLC）[]
和胶束毛细管电泳（MEKC）[]等。但这些方法分析周期长，所测成分单一，因此，为了进一步有效控制酸枣仁的质量，提高临床用药的安全性，需要建立一个可靠、准确的分析方法来对其多组分进行同时测定。
本研究建立了HPLC-ESI-MS/MS法同时测定酸枣仁药材中9种化学成分，并将其应用于不同来源市售酸枣仁的质量分析，可为酸枣仁药材的质量控制提供科学依据。
1 仪器与试药
对照品酸枣仁皂苷A（批号510）、酸枣仁皂苷B（批号607）、芦丁（批号707）均购自中国食品药品检定研究院（质量分数均大于98%）；斯皮诺素（批号121220）购自成都普菲德生物技术有限公司（质量分数大于98%）；白桦脂酸（批号100904）、白桦脂醇（批号zl）均购自南京泽朗医药科技有限公司（质量分数均大于98%）；芹菜素（批号101129）购自上海融禾医药科技有限公司（质量分数大于98%）；柚皮苷（批号FY）、橙皮苷（批号FY）均购自南京飞宇生物技术股份有限公司（质量分数均大于98%）。
乙腈为色谱纯（美国J. T. Baker公司）；水为纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）；甲酸为色谱纯（美国Dikma公司）；其他试剂均为分析纯。酸枣仁Ziziphi Spinosae Semen取自不同产地酸枣Ziziphus jujuba Mill. var.spinosa (Bunge) Hu ex H. F. Chou，由河北医科大学药学院生药学李连怀副教授鉴定。样品具体信息见表 1。
表 1(Table 1)
表 1 酸枣仁样品
Table 1 Samples of Ziziphi Spinosae Semen
表 1 酸枣仁样品
Table 1 Samples of Ziziphi Spinosae Semen
Agilent1200高效液相色谱仪，配有在线脱气机，四元泵，自动进样器（美国Agilent公司）；3200QTRAPTM三重四级杆线性离子阱质谱仪，配有ESI离子源（美国AB公司）；Analyst 1.5.2 software数据系统（美国AB公司）；SCQ-200超声波清洗器（100 W，25 kHz）（上海声谱超声波设备厂）；BP211D型十万分之一天平（德国Sartorius公司）。
2 方法与结果
2.1 分析条件
2.1.1 色谱条件
色谱柱Sapphire C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为水（A，1 mmol/L乙酸铵-0.1%的甲酸）-乙腈（B），梯度洗脱（0～2 min，20%～95% B；2～12 min，95% B），进样前按流动相初始条件平衡6 min；体积流量1 mL/min；柱温30 ℃；进样量10 μL。对照品和样品的提取多反应监测模式（MRM）色谱图见图 1。
图 1 对照品 (A)、酸枣仁样品 (B) 的多重反应监测色谱图和对照品二级质谱图 (C)
Fig. 1 MRM chromatograms of reference substances (A) and Semen Ziziphi Spinosae samples (B)and second mass spectrum of reference substances (C)
2.1.2 质谱条件
离子源为电喷雾离子化源（ESI）；MRM进行定量分析；采用负离子检测模式；源喷射电压（IS）为-4 500 V；离子源温度为650 ℃；雾化气（GS1，N2）压力为413.70 kPa；辅助气（GS2，N2）压力为448.18 kPa；气帘气（N2）压力为206.85 kPa。接口加热，全程通入氮气，MRM模式定量。监测的离子对，解簇电压（DP）和碰撞能量（CE）见表 2。9种被测成分的二级质谱图见图 1。
表 2(Table 2)
表 2 酸枣仁中9种成分的质谱数据
Table 2 HPLC-ESI-MSn data of nine constituents from Ziziphi Spinosae Semen
相对分子质量
离子源模式
酸枣仁皂苷A
酸枣仁皂苷B
表 2 酸枣仁中9种成分的质谱数据
Table 2 HPLC-ESI-MSn data of nine constituents from Ziziphi Spinosae Semen
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
分别称取对照品酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素、白桦脂酸、白桦脂醇、芦丁、芹菜素、橙皮苷、柚皮苷适量，精密称定，加75%甲醇制成对照品溶液。分别取各对照品溶液适量，摇匀，即得酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素、白桦脂酸、白桦脂醇、芦丁、芹菜素、橙皮苷、柚皮苷的混合对照品溶液，质量浓度分别为12.000、25.000、5.313、175.000、327.500、95.000、0.231、80.000、0.375 μg/mL。
2.2.2 供试品溶液的制备
将洁净酸枣仁于40 ℃条件下干燥8 h，研磨后过40目筛。取酸枣仁粉末约5 g，置于索氏提取器中，用石油醚（60～90 ℃）浸泡过夜（8 h），脱脂2次，每次2 h，回收石油醚。将脱脂粉末挥尽残醚至无醚味，精密称取1 g酸枣仁脱脂粉，转移至25 mL具塞三角瓶中，精密加入75%甲醇20 mL，称质量，冰浴超声1 h，再称质量，用75%甲醇补足减失的质量，取上清液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 方法学考察
2.3.1 线性关系、定量限和检测限
精密量取上述混合对照品溶液适量，采用倍数稀释法进行稀释，得到6个不同质量浓度的系列对照溶液，按照上述色谱和质谱条件进行分析，并记录色谱峰面积。以对照品的质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，并进行线性回归，得标准曲线方程（表 3）。将混合对照品溶液逐步稀释并进行测定，分别以信噪比为10和3时各对照品的量作为定量限（LOQ）和检测限（LOD）。结果9种待测组分的质量浓度和峰面积的相关系数（r）均大于0.998 4，表明该方法的线性关系良好，各组分的回归方程、线性范围、检测限（LOQ）和定量限（LOD）见表 3。
表 3(Table 3)
表 3 9种成分的回归方程、相关系数、线性范围、定量限和检测限
Table 3 Regression equations,correlation coefficients,linear ranges,LODs,and LOQs of nine constituents
标准曲线方程
线性范围/(μg·mL-1)
LOD/(ng·mL-1)
LOQ/(ng·mL-1)
酸枣仁皂苷A
Y＝476.37 X＋7.965 2
0.375～12.00
酸枣仁皂苷B
Y＝353.86 X－81.920
0.781～25.00
Y＝74 838 X＋66 546
0.166～5.313
Y＝245 066 X＋5 000 000
5.469～175.0
Y＝248.21 X＋24 711
20.47～655.0
Y＝253 404 X－623.01
0.007～0.231
Y＝6 779.3 X＋359.2
0.578～18.50
Y＝8 012.3 X－1 207.4
0.156～10.00
Y＝14 562 X＋65.046
0.012～0.375
表 3 9种成分的回归方程、相关系数、线性范围、定量限和检测限
Table 3 Regression equations,correlation coefficients,linear ranges,LODs,and LOQs of nine constituents
2.3.2 精密度试验
取同一批号（赞皇-3）酸枣仁样品，取约1 g，精密称取6份，按“2.2.2”项下操作，制备供试品溶液，在“2.1”色谱条件下记录9种化合物的峰面积，计算RSD值，考察日内精密度。取同一批号（赞皇-3）酸枣仁样品，取约1 g，精密称取6份，按“2.2.2”项下操作，制备供试品溶液，在上述色谱条件下记录9种待测成分的峰面积，连续3 d测定计算RSD值，考察日间精密度。结果显示日内精密度及日间精密度的RSD值分别小于0.38%和0.47%，表明该方法精密度良好。
2.3.3 加样回收率试验
精密称取已测定的酸枣仁样品0.5 g，分别精密加入高、中、低3个水平的对照品溶液，每个水平3份，共9份，按“2.2.2”项下方法操作，制备供试品溶液。按上述的色谱条件测定9个化合物的峰面积，计算回收率及RSD值。结果9种被测成分的平均回收率为98.04%～101.5%，RSD值为0.03%～0.74%。
2.3.4 稳定性试验
取同一供试品溶液（赞皇-3），分别于0、2、4、8、12、24 h进样分析测定，记录峰面积，考察供试品溶液的稳定性。结果表明所有被测物峰面积的RSD＜0.42%，说明样品稳定性良好。
重复性试验 取同一批号（赞皇-3）酸枣仁样品，取约1 g，精密称取6份，按“2.2.2”项下操作，制备供试品溶液，在“2.1”色谱条件下记录9种化合物的峰面积，计算RSD值，考察重复性。9种化合物的RSD值均小于0.38%，符合规定，表明本方法重复性良好。
2.4 样品测定
取不同批次的酸枣仁样品，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，按照“2.1”项下的条件进行测定，记录色谱峰面积，将9个待测成分的峰面积代入相应的标准曲线方程中，并计算其质量分数。不同批号的酸枣仁的测定结果见表 4。
表 4(Table 4)
表 4 酸枣仁中9种成分的测定结果
Table 4 Determination of nine constituents in Ziziphi Spinosae Semen
质量分数/(μg·g-1)
酸枣仁皂苷A
酸枣仁皂苷B
表 4 酸枣仁中9种成分的测定结果
Table 4 Determination of nine constituents in Ziziphi Spinosae Semen
8批酸枣仁中9种成分的总量在45.00～215.14 μg/g，表明这9种成分在不同产地不同批次的酸枣仁中的总量有明显的不同，样品4、5和3的总量最高，分别是215.14、210.12、203.32 μg/g，样品1和2的总量次之，为193.54和182.45 μg/g，而样品8（伪品滇枣仁）量最低，为45.00 μg/g。7批正品酸枣仁的平均量是177.3 μg/g。平均质量分数最高的成分是白桦脂酸97.30 μg/g，接着是白桦脂醇53.57 μg/g，芦丁10.86 μg/g，酸枣仁皂苷B 6.80 μg/g。芹菜素、橙皮苷和柚皮苷是平均量较低的成分，而柚皮苷在伪品滇枣仁中没有检测到。从整体来看，河北赞皇的酸枣仁有效成分量高，河北承德次之，山西第三，伪品酸枣仁量最低。这些分析结果表明不同产地甚至是相同产地不同批次的酸枣仁中9种待测物的量存在着很大差异。
本实验首次建立了一种快速、准确的HPLC-
MS/MS分析方法，用于同时测定酸枣仁中的9种化合物（酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素、白桦脂酸、白桦脂醇、芦丁、芹菜素、橙皮苷、柚皮苷）。该方法成功检测了市售常见的8批酸枣仁样品，结果表明不同产地或是相同产地不同批次的酸枣仁9种成分的量存在着差异。HPLC-MS/MS方法为酸枣仁的质量控制提供了可靠地分析手段。
实验比较了以50%、75%、90%、100%甲醇，75%乙醇，纯乙醇为提取媒介，提取供试品，结果表明以75%甲醇提取效率较高。之后比较了超声提取及加热回流提取效果，2种方式提取率相近，由于超声提取相对方便快捷，因此选择超声提取法。此外还考察了提取30、45、60、90 min对待测成分的提取效果，结果表明超声提取60 min，提取效率较高。
流动相的选择，分别以甲醇-水、乙腈-水作为流动相进行梯度洗脱，结果表明以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱时9种待测物均有很好的分离，所以选择乙腈为流动相。为改善峰形，比较了乙腈-甲酸（0.05%、0.1%、0.2%和0.3%）为流动相时的分离效果，结果显示乙腈-0.1%甲酸水峰形较好。为了提高皂苷类化合物在质谱中的离子稳定性，在流动相中加入了乙酸铵（0.5、1、2、3 mmol/L），结果显示流动相为水（1 mmol/L乙酸铵-0.1%的甲酸）-乙腈时，峰形更好。
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